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QuantStudio5實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)操作指南

更新時(shí)間:2025-12-04      點(diǎn)擊次數(shù):194

一、核心操作流程(配流程圖)

ScreenShot_2025-12-04_172431_981.png

1.1 開機(jī)與初始化

快速啟動(dòng) :
接通電源 → 點(diǎn)擊觸摸屏激活系統(tǒng) → 完成30秒自檢(LED指示燈全綠表示就緒)

溫控校準(zhǔn) :
第1次使用需執(zhí)行"Calibration"模塊,全程≤8分鐘(自動(dòng)生成校準(zhǔn)報(bào)告)

1.2 實(shí)驗(yàn)方案設(shè)置

參數(shù)類型推薦設(shè)置優(yōu)化建議
反應(yīng)體積10-20μL(兼容96/384孔板)低至5μL可用專用密封膜
擴(kuò)增程序預(yù)置8種模板(例如:Fast 40循環(huán))可自定義梯度PCR參數(shù)
熒光通道五通道靈活配置支持SYBR Green/TaqMan 雙體系

操作提示:拖拽式編程界面使流程搭建時(shí)間縮短70%

1.3 耗材裝載規(guī)范

板位識(shí)別 :

條形碼自動(dòng)識(shí)別板型(支持SKU:A28141/A28142)

智能壓板裝置防錯(cuò)設(shè)計(jì)(壓力值實(shí)時(shí)顯示)

密封要求 :

光學(xué)密封膜(Cat. No. 4311971)透光率>99%

自動(dòng)檢測(cè)密封完整性(避免蒸發(fā)誤差)

二、關(guān)鍵性能優(yōu)化技巧

2.1 提升數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性

光學(xué)校準(zhǔn) :
每月執(zhí)行"OptiCheck"(2分鐘完成孔間均一性驗(yàn)證)

低豐度樣本策略 :

1. 啟用高靈敏度模式(HS選項(xiàng))  

2. 增加循環(huán)數(shù)至45(Ct值>35時(shí))  

3. 使用TaqMan預(yù)混液(檢出限達(dá)1拷貝/μL)  

2.2 通量Z大化方案

工作模式每日處理量適用場(chǎng)景
標(biāo)準(zhǔn)96孔576樣本基因表達(dá)譜分析
高速384孔2304樣本大規(guī)模基因分型
雙板位運(yùn)行1152樣本多組學(xué)聯(lián)合研究
基于20小時(shí)連續(xù)運(yùn)行計(jì)算

三、智能數(shù)據(jù)分析管理

3.1 四步完成結(jié)果解讀

自動(dòng)基線校正 :
算法智能識(shí)別背景熒光(支持手動(dòng)調(diào)整)

閾值設(shè)定 :
默認(rèn)采用ΔRn=0.2,或按ROX染料校準(zhǔn)

多格式導(dǎo)出 :

PDF報(bào)告(含擴(kuò)增曲線/熔解曲線)

Excel原始數(shù)據(jù)(含SD值)

云平臺(tái)協(xié)作 

• 掃碼上傳至Thermo Fisher Cloud(項(xiàng)目組共享)  

• 在線進(jìn)行ΔΔCt分析(無需本地軟件)  

四、維護(hù)與質(zhì)控指南

4.1 日常維護(hù)計(jì)劃

周期操作項(xiàng)目耗時(shí)
每次使用后清潔樣品槽(無塵布擦拭)2分鐘
每月光學(xué)鏡頭除塵5分鐘
每季度固件升級(jí)(WiFi自動(dòng)推送)10分鐘

4.2 質(zhì)控流程(符合ISO 17025)

每周運(yùn)行NIST標(biāo)準(zhǔn)品(SRM 2372)

驗(yàn)證參數(shù):

斜率:-3.1~-3.5

R2 ≥0.995

生成電子質(zhì)控報(bào)告(支持審計(jì)追蹤)

五、高頻問題解決方案

Q1 孔間溫度不均?
→ 執(zhí)行"Plate Uniformity Test"(診斷結(jié)果自動(dòng)優(yōu)化溫控參數(shù))

Q2 熒光信號(hào)波動(dòng)?
→ 檢查:

密封膜完整性(更換Cat. No. 4311971)

光學(xué)鏡面清潔度(使用專用清潔棒)

Q3 如何提升多色檢測(cè)精度?
→ 啟用光譜校正矩陣(預(yù)置TAMRA/Cy5補(bǔ)償參數(shù))

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